產(chǎn)品貨號: 554656
英文名稱：Stain Buffer (FBS)
產(chǎn)品規(guī)格：500 mL
產(chǎn)品品牌：BD
產(chǎn)品簡介：
BD Pharmingen stain buffer染色緩沖液(FBS)可用于淋巴組織、骨髓、外周血或培養(yǎng)細(xì)胞制備的單細(xì)胞懸液的免疫熒光染色。染色緩沖液(FBS)對熒光試劑的稀釋和應(yīng)用以及用于流式細(xì)胞儀分析的細(xì)胞的懸浮液、洗滌和存儲都是有用的?；谥皩θ旧囵B(yǎng)基的報道，染色緩沖液(FBS)被配制成中性pH (pH 7.4)緩沖鹽溶液(即DPBS)，其中添加了熱滅活(56°C, 30分鐘)胎牛血清(FBS)蛋白。因此，染色緩沖液(FBS)旨在維持細(xì)胞活力，并最大限度地提高ph敏感熒光色素(如異硫氰酸熒光素(FITC))產(chǎn)生的熒光信號強(qiáng)度。此外，染色緩沖液(FBS)含有代謝抑制劑。NaN3抑制抗體交聯(lián)引起的細(xì)胞表面抗原的潛在再分配(例如，由于脫落或內(nèi)化)。因此，在后續(xù)的流式細(xì)胞術(shù)分析中，NaN3(與維持低溫環(huán)境溫度相結(jié)合)可以防止免疫熒光染色細(xì)胞產(chǎn)生的熒光信號強(qiáng)度的潛在損失。
產(chǎn)品應(yīng)用:
流式細(xì)胞術(shù)(常規(guī)檢測)
運(yùn)輸與儲存：
保存在4°C未稀釋。
推薦的實驗流程：
1. 使用標(biāo)準(zhǔn)方案從淋巴組織、骨髓、外周血或細(xì)胞培養(yǎng)中制備單細(xì)胞懸液。
2. 在冷染色緩沖液(FBS)中洗滌細(xì)胞兩次，并通過離心將細(xì)胞制成顆粒(例如，在4°C下300 x g)。用冷染色緩沖液(FBS)重懸細(xì)胞顆粒至最終濃度為2 × 10e7 cells/ml。
3.將50μl等量的細(xì)胞懸液(10e6細(xì)胞)分配到試管或微孔板的圓底孔中。
4. 在染色緩沖液(FBS)中稀釋熒光抗體至預(yù)定的最佳濃度，并將少量稀釋抗體(如10μl)加入含有目標(biāo)細(xì)胞懸液的試管或微孔中。在避光冰上孵育20分鐘。染色時間可能增加(≥45分鐘)取決于熒光抗體的熱情。
5. 用200μl(微孔板)或1ml(試管)染色緩沖液(FBS)洗滌細(xì)胞兩次，以去除未結(jié)合的抗體。細(xì)胞以300 x g離心5分鐘。每次離心后，小心地抽吸(用于微孔板或試管)或倒置并吸走(用于試管)細(xì)胞顆粒上清。
6. 將細(xì)胞顆粒重懸在200μl(用于微孔板)或0.5 ml(用于試管)的染色緩沖液(FBS)中。將染色細(xì)胞從微孔板轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)脑嚬苤羞M(jìn)行流式細(xì)胞分析(將最終體積調(diào)整到~0.5 ml)。
7. 染色后盡快(如≤4小時)用流式細(xì)胞儀分析染色后的細(xì)胞樣本。如果必須延遲分析，那么染色細(xì)胞可以用緩沖多聚甲醛固定(例如，BD Cytofix?固定緩沖液;貓。編號554655)，4°C保存(避光)。應(yīng)盡快對固定的細(xì)胞進(jìn)行分析(如染色和固定后一周)
注1:染色緩沖液(FBS)同樣可以用于細(xì)胞的間接免疫熒光染色。在這種情況下，當(dāng)使用未標(biāo)記或生物素化一抗時，重復(fù)步驟4和步驟5。當(dāng)使用生物素化抗體和熒光偶聯(lián)親和素對細(xì)胞進(jìn)行染色時，最好使用不含生物素的染色介質(zhì)，如染色緩沖液(BSA) (Cat。554657號)
注2:染色緩沖液(FBS)也可用于固定細(xì)胞表達(dá)的表面抗原的免疫熒光染色和細(xì)胞內(nèi)抗原(如細(xì)胞因子)的免疫熒光染色。細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色的細(xì)胞可以在流式細(xì)胞儀分析之前，在染色緩沖液(FBS)中重懸和維持(例如，在4°C，避光)。
關(guān)于公司：
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