一、陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)

1. 原理

• 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)是驗(yàn)證環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑準(zhǔn)確性的重要方法之一。其原理是通過(guò)模擬非滅菌環(huán)境，使生物指示劑中的芽孢能夠正常生長(zhǎng)，以此來(lái)證明指示劑中的芽孢是具有活性的，并且培養(yǎng)基能夠支持芽孢的生長(zhǎng)。如果在陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)中芽孢正常生長(zhǎng)，說(shuō)明生物指示劑在正常情況下能夠正確反映微生物的存活狀態(tài)。

2. 操作步驟

• 準(zhǔn)備一個(gè)未經(jīng)過(guò)環(huán)氧乙烷滅菌處理的生物培養(yǎng)指示劑作為陽(yáng)性對(duì)照樣本。將其放置在適宜的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度一般為 30 - 37℃，培養(yǎng)時(shí)間為 24 - 48 小時(shí)。這個(gè)環(huán)境條件應(yīng)與后續(xù)用于判斷滅菌是否成功的培養(yǎng)條件相同。

• 觀察培養(yǎng)后的陽(yáng)性對(duì)照樣本。如果培養(yǎng)基出現(xiàn)顏色變化（如變色、渾濁等），表明芽孢正常生長(zhǎng)，生物指示劑中的芽孢是有活性的，培養(yǎng)基也能為芽孢生長(zhǎng)提供合適的條件，這就初步驗(yàn)證了生物指示劑在微生物能夠生長(zhǎng)的情況下可以給出正確的陽(yáng)性結(jié)果。

二、陰性對(duì)照試驗(yàn)

1. 原理

• 陰性對(duì)照試驗(yàn)主要用于驗(yàn)證生物培養(yǎng)指示劑在經(jīng)過(guò)有效滅菌處理后是否能夠正確顯示滅菌成功的狀態(tài)。通過(guò)將生物指示劑在已知的有效滅菌條件下進(jìn)行處理，然后觀察其是否顯示滅菌成功，來(lái)判斷生物指示劑的準(zhǔn)確性。如果在有效滅菌后，生物指示劑沒(méi)有出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)的跡象，說(shuō)明它能夠正確反映滅菌成功的情況。

2. 操作步驟

• 選取一批環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑，將它們與經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)滅菌物品一起放入環(huán)氧乙烷滅菌器中。使用標(biāo)準(zhǔn)的滅菌參數(shù)，如環(huán)氧乙烷濃度為 450 - 1200mg/L、溫度為 37 - 63℃、相對(duì)濕度為 40% - 80% 和滅菌時(shí)間為 1 - 6 小時(shí)進(jìn)行滅菌處理。這些參數(shù)應(yīng)是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證能夠有效殺滅生物指示劑中芽孢的條件。

• 滅菌完成后，將生物指示劑取出，放入適宜的培養(yǎng)環(huán)境（30 - 37℃）中培養(yǎng) 24 - 48 小時(shí)。觀察培養(yǎng)后的生物指示劑，如果沒(méi)有出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)的跡象，如培養(yǎng)基顏色不變、沒(méi)有渾濁等現(xiàn)象，表明生物指示劑能夠正確顯示滅菌成功的情況，從而驗(yàn)證了其準(zhǔn)確性。

三、與標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑對(duì)比

1. 原理

• 標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑是經(jīng)過(guò)權(quán)威機(jī)構(gòu)或嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證，具有已知準(zhǔn)確性的生物指示劑。將待驗(yàn)證的環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑與標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑在相同的滅菌和培養(yǎng)條件下進(jìn)行測(cè)試，通過(guò)比較兩者的結(jié)果來(lái)驗(yàn)證待驗(yàn)證指示劑的準(zhǔn)確性。如果待驗(yàn)證指示劑的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑一致，那么可以認(rèn)為其準(zhǔn)確性是可靠的。

2. 操作步驟

• 選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑，其芽孢種類、數(shù)量以及培養(yǎng)基等特性應(yīng)與待驗(yàn)證的環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑相似。將待驗(yàn)證的生物培養(yǎng)指示劑和標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑同時(shí)放置在相同的待滅菌物品的關(guān)鍵位置，如在一批醫(yī)療器械的內(nèi)部管道或包裝中心位置。

• 按照相同的環(huán)氧乙烷滅菌程序?qū)@些物品進(jìn)行滅菌處理，然后在相同的培養(yǎng)條件下（30 - 37℃，24 - 48 小時(shí)）進(jìn)行培養(yǎng)。

• 觀察并比較兩者的培養(yǎng)結(jié)果。如果待驗(yàn)證的生物培養(yǎng)指示劑和標(biāo)準(zhǔn)生物指示劑的結(jié)果（如生長(zhǎng)或未生長(zhǎng)）完全一致，那么可以認(rèn)為待驗(yàn)證的生物培養(yǎng)指示劑具有較高的準(zhǔn)確性。如果出現(xiàn)不一致的情況，需要進(jìn)一步分析原因，可能是待驗(yàn)證指示劑的芽孢活性、培養(yǎng)基質(zhì)量或者其他因素存在問(wèn)題。

四、重復(fù)性試驗(yàn)

1. 原理

• 重復(fù)性試驗(yàn)是為了驗(yàn)證環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑在相同的滅菌和培養(yǎng)條件下是否能夠給出一致的結(jié)果。通過(guò)多次重復(fù)相同的試驗(yàn)過(guò)程，觀察生物指示劑的表現(xiàn)，來(lái)判斷其準(zhǔn)確性的穩(wěn)定性。如果生物指示劑在多次重復(fù)試驗(yàn)中都能準(zhǔn)確地反映滅菌成功或失敗的情況，說(shuō)明其準(zhǔn)確性是可靠的。

2. 操作步驟

• 選取一定數(shù)量（例如 10 - 20 個(gè)）的環(huán)氧乙烷滅菌生物培養(yǎng)指示劑，將它們分成若干組。每組的生物指示劑與相同的待滅菌物品一起，按照相同的環(huán)氧乙烷滅菌參數(shù)（如濃度、溫度、濕度和時(shí)間）進(jìn)行滅菌處理。

• 滅菌完成后，將每組生物指示劑在相同的培養(yǎng)條件下（30 - 37℃，24 - 48 小時(shí)）進(jìn)行培養(yǎng)。記錄每組生物指示劑的培養(yǎng)結(jié)果，觀察是否出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)的跡象。

• 對(duì)多組試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。如果大部分（例如 90% 以上）的試驗(yàn)結(jié)果是一致的，即要么都顯示滅菌成功，要么都顯示滅菌失敗，那么可以認(rèn)為該生物培養(yǎng)指示劑具有良好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。如果出現(xiàn)較多不一致的結(jié)果，需要對(duì)生物指示劑的質(zhì)量、滅菌過(guò)程或者培養(yǎng)條件等因素進(jìn)行檢查和調(diào)整。